El test de Ames, un método ampliamente utilizado para determinar si una sustancia química es capaz de causar cáncer, se ha adaptado con éxito para su uso con el humo del cigarrillo y otros aerosoles complejos.
La prueba Ames tradicional no es adecuado para uso con aerosoles y gases, lo que significa que en el pasado, la toxicidad de humo de cigarrillos se ensayó usando sólo el extracto de partículas del humo y no todo el humo, dando así una imagen incompleta del perfil tóxico . La fracción de partículas es sólo una pequeña parte de la totalidad de aerosol de humo de tabaco, que también comprende una fase de vapor y contiene más de 6.000 sustancias químicas, incluyendo componentes volátiles o insolubles y productos de corta duración de la combustión.
La prueba de Ames trabaja mediante la observación de la cantidad de un químico causa bacterias utilizadas en la prueba de mutar. La prueba estándar implica hasta cinco cepas de bacterias que mutan de diferentes maneras y se modifican genéticamente para requerir un aminoácido adicional para el crecimiento. Las bacterias están incrustados en agar junto con la sustancia de ensayo y una pequeña cantidad del aminoácido para que puedan crecer y mutar. La mutagenicidad del compuesto de ensayo es proporcional al número de los llamados colonias revertientes presentes al final del periodo de prueba, es decir, el número de colonias que han mutado (volvió) de nuevo al estado original y no requieren que el aminoácido sobrevivir.
Ahora, investigadores de la British American Tobacco y Covance laboratorios han demostrado que una prueba de Ames modificada puede ser utilizado con éxito para evaluar el impacto toxicológico de la corriente principal de humo de cigarrillo.
Los investigadores modificaron la prueba cambiando las cepas bacterianas utilizadas y el método por el cual están expuestos a la sustancia de ensayo.
Dos cepas de salmonella typhimuriumand uno de Escherichia coliwere utilizar - todo aceptado bajo los lineamientos regulatorios actuales -además dos derivados de S. typhimurium seleccionados para una sensibilidad de nitroarenos y aminas aromáticas, mutágenos conocidos presentes en el humo del cigarrillo.
Los investigadores modificarse adicionalmente la prueba mediante la difusión de las bacterias en la parte superior del agar para asegurar que fueron expuestos directamente a todo el aerosol de humo - una exposición más relevante que sumergiéndolas. Se utilizó un sistema de aerosol comercialmente disponible (VC 10 Vitrocell robot) para diluir la corriente principal de humo de cigarrillos en un flujo constante ajustable de aire que se introduce sobre las bacterias. Para ayudar a cuantificar la exposición al humo, microbalanzas de cuarzo-cristal, una herramienta de dosimetría de reciente aparición, se han incrustado en un pocillo separado para medir partículas sólidas de aterrizaje en la superficie.
Tras la exposición a cuatro concentraciones de la corriente principal del humo del cigarrillo, los investigadores encontraron aumentos relacionados con la concentración en el número de colonias revertidas por las cepas de Salmonella, lo que indica que las causas de humo (ciertos) mutaciones en una forma dependiente de la dosis (doi: 10.1016 / j.mrgentox .2014.04.017).
'Hemos demostrado actividad en un número de cepas, algunas con mayor sensibilidad que otras. Creemos que esto ofrecerá una plataforma para la exposición, así como más detalles en torno a las condiciones necesarias para el ensayo para permitir que otros utilicen el método en su propio laboratorio ", dice Debbie Dillon de BAT, el autor principal. 'El método se ilustra actualmente usando humo conjunto, pero puede ser modificado para probar otros aerosoles y gases.'
El siguiente paso es investigar cepas adicionales Ames e incorporar el más eficaz en una batería de pruebas-regulador aceptable para el humo del cigarrillo.
La prueba de Ames, se utiliza ampliamente para el cribado inicial de genotoxicidad productos farmacéuticos y productos químicos. La prueba se rige por (OCDE / ICH) internacionales, y es un elemento central de un paquete de datos preclínicos esperada por los reguladores de muchos bienes de consumo.
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